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Communications Biology volume 6, Article number: 600 (2023) Citer cet article

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Une inflammation excessive est une cause postulée de maladie grave et de décès dans les infections virales respiratoires. En réponse à une infection grave par le virus de la grippe, des cellules T CD4 + naïves spécifiques à l'hémagglutinine transférées de manière adoptive à partir de souris 6,5 transgéniques CD4 + TCR entraînent une réponse Th1 productrice d'IFN-γ chez des souris de type sauvage. Il aide à l'élimination du virus mais provoque également des dommages collatéraux et une aggravation de la maladie. Les souris donneuses 6,5 possèdent toutes les cellules T CD4+ avec une spécificité TCR vis-à-vis de l'hémagglutinine grippale. Pourtant, les 6,5 souris infectées ne souffrent pas d'une inflammation robuste et d'une issue grave. La réponse Th1 initiale diminue avec le temps, et une réponse Th17 proéminente des émigrants thymiques récents atténue l'inflammation et confère une protection à 6,5 souris. Nos résultats suggèrent que le TGF-β activé par la neuraminidase virale des cellules Th1 guide l'évolution de Th17 et que la signalisation de l'IL-17 via le récepteur non canonique de l'IL-17 EGFR active la protéine d'échafaudage TRAF4 plus que TRAF6 lors du soulagement de l'inflammation pulmonaire dans les cas graves. grippe.

Les virus respiratoires sont à l'origine de maladies infectieuses émergentes graves. Le résultat clinique dépend de l'interaction entre le virus envahisseur et la réponse immunitaire de l'hôte. L'invasion virale provoque un effet cytopathique qui entraîne des lésions tissulaires dans les voies respiratoires. Le système immunitaire de l'hôte réagit pour éliminer le virus, mais la réponse contribue également à l'inflammation. Si l'activation immunitaire et l'inflammation diminuent avec la clairance du virus, la personne infectée se remet efficacement d'une infection. Cependant, l'activation immunitaire et l'inflammation peuvent persister au-delà de la clairance du virus. Une activation immunitaire prolongée et exagérée provoque une aggravation de la maladie. Les conséquences indésirables des infections par le virus de la grippe saisonnière ou pandémique, le SRAS, le MERS et les pandémies de COVID-19 en cours en sont des exemples1. La modulation de l'inflammation avec des réactions immunitaires écrasantes est toujours un objectif dans la gestion de la maladie. Le corticostéroïde en tant qu'agent couramment utilisé pour apaiser l'inflammation pulmonaire altère également la clairance des agents pathogènes avec une inflammation supprimée et peut aggraver la maladie, comme on le voit chez les patients atteints de grippe grave2,3,4,5, SRAS6, MERS7 et COVID-198.

Le ciblage des cytokines est une autre option pour supprimer l'inflammation. Le tocilizumab et le sarilumab ciblent l'interleukine (IL)-6 et peuvent aider les patients COVID-199. L'IL-17 est également une cytokine pro-inflammatoire bien connue10. Les niveaux élevés d'IL-17 chez les patients atteints de maladies graves comme le COVID-191,11,12, le SRAS13, le MERS14 et la grippe15 font de l'IL-17 une cible possible de manipulation16. Nous avons détecté de l'IL-17 dans le sérum de nos patients atteints de COVID-1911 sévère, ainsi que dans des lymphocytes T CD4+ spécifiques de l'antigène grippal infiltrant les poumons dans notre modèle murin expérimental de grippe sévère17,18.

Dans notre modèle de souris spécifique à l'antigène de l'hémagglutinine (HA) de la grippe, le virus de la grippe entraîne une réponse Th1 de lymphocytes T CD4 + spécifiques à l'HA naïfs transférés de manière adoptive dans les poumons17, 18, 19, 20, 21, 22. Les 2,5 × 106 cellules donneuses transférées de manière adoptive aident à l'élimination du virus mais stimulent l'inflammation dans les poumons et augmentent la mortalité. L'infection par le virus de la grippe des souris donneuses, les souris 6,5 transgéniques du récepteur des cellules T CD4 + (TCR) spécifiques à l'HA23, entraîne l'activation de toutes les cellules T CD4 + chez ces souris, car toutes leurs cellules T CD4 + ont les TCR spécifiques à l'HA du virus de la grippe. Nous nous attendions à un résultat grave avec une réponse Th1 aussi massive de tous les lymphocytes T CD4+ chez les 6,5 souris infectées. Bien qu'ils aient perdu plus de poids au début, ils ont souffert d'une légère inflammation pulmonaire et se sont bien rétablis. Leur rétablissement a été associé à une réponse Th17 importante les jours 6 et 9. Ici, nous avons étudié le rôle de la réponse Th17 dans la protection des souris contre la grippe sévère. Nous avons démontré une évolution guidée par Th1 de la réponse Th17. Nos résultats suggèrent que le TGF-β activé par la neuraminidase virale des cellules Th1 guide l'évolution de Th17. La signalisation de l'IL-17 via le récepteur non canonique de l'IL-17 EGFR active la protéine d'échafaudage TRAF4 plus que TRAF6 lors du soulagement de l'inflammation pulmonaire dans la grippe sévère.

Dans notre modèle de souris spécifique à l'antigène de l'hémagglutinine (HA) de la grippe17,18,19,20,21,22, des souris de type sauvage ont reçu un transfert adoptif de 2,5 × 106 cellules T CD4+ spécifiques à l'HA naïves provenant de 6,5 souris donneuses (souris WT + 6,5 cellules) et a obtenu 2,5 × 103 unités formant plaque (pfu) de la souche PR8 de l'infection par le virus de la grippe H1N1. Les cellules T 6,5 CD4 + spécifiques de HA infiltrant les poumons (cellules donneuses 6,5) ont produit de l'IFN-γ avec l'induction du facteur de transcription Th1 T-bet (Fig. 1a). Il y avait une production d'IL-17 au niveau de base avec un facteur de transcription Th17 négligeable ROR-γt (Fig. 1a, Note complémentaire 1, Fig. Supplémentaire 1). Le transfert adoptif a aggravé la maladie des souris de type sauvage infectées par le virus de la grippe. Les poumons étaient enflammés (Fig. 1b) et les cellules du donneur 6,5 infiltrant les poumons ont acquis une fonction effectrice au jour 6. Ces cellules ont augmenté la prolifération stimulée par le peptide HA de cellules T CD4 + naïves apparentées in vitro (Fig. 1b). La charge virale a également diminué dans les poumons du jour 3 au jour 9, comme l'a révélé le test de plaque (Fig. 1c). Les souris ont continué à perdre du poids corporel jusqu'au jour 8, lorsque certaines d'entre elles ont commencé à mourir (Fig. 1c).

Réponse Th17 a – c et inflammation pulmonaire atténuée chez des souris 6,5 transgéniques CD4 + TCR spécifiques à HA. a Réponses Th1 et Th17 des lymphocytes T CD4+ spécifiques à HA infiltrant les poumons, b Panneaux supérieurs : pathologie pulmonaire macroscopique au jour 6 ; Panneaux inférieurs : prolifération des lymphocytes T CD4+ spécifiques à HA naïfs in vitro avec des cellules répondant aux infections provenant des poumons ou de la rate (c) charge virale dans les poumons, perte de poids corporel et survie. Des souris non transgéniques de type sauvage (WT) ont reçu un transfert adoptif de 2, 5 × 106 lymphocytes T CD4 + spécifiques à HA naïfs avec infection, comme décrit dans le texte, et ont servi de témoins. d Perte de survie avec déficit en IL-17 chez des souris 6,5 transgéniques TCR. Perte de poids corporel et mortalité sévères avec plus de sécrétion de cytokines inflammatoires par les lymphocytes T CD4 + et CD8 + infiltrant les poumons chez les souris IL-17KO infectées que chez les souris 6,5 transgéniques TCR compétentes en IL-17. Les photographies sont représentatives et les autres valeurs sont des moyennes ± sd d'au moins 3 expériences (n = 6/groupe ; ***p < 0,0001 ; NS non significatif, p > 0,05 ; valeurs P bilatérales pour le test t non apparié à comparer deux groupes à un moment précis, ANOVA à deux facteurs pour les courbes de poids corporel et test de Gehan – Breslow – Wilcoxon pour les courbes de survie).

Les souris donneuses des lymphocytes T 6,5 CD4+ spécifiques de HA naïfs, les souris transgéniques 6,5 TCR, ont un TCR monotone sur leurs lymphocytes T CD4+, avec le même TCR α/β répondant à un épitope restreint du HA de classe II I-Ed du CMH à partir de la souche A/PR/8/34 (PR8) du virus de la grippe H1N123. Nous nous attendions à un résultat grave de l'infection par le virus de la grippe chez les 6,5 souris donneuses, avec une réponse Th1 massive de toutes les cellules T CD4 + chez les 6,5 souris infectées. Contrairement à notre anticipation, la réponse Th1 proéminente avec production d'IFN-γ n'a été notée qu'au jour 3, mais pas par la suite aux jours 6 et 9 après une infection par le virus PR8 de 2, 5 × 103 pfu (Fig. 1a). Aux jours 6 et 9, avec l'activation du facteur de transcription Th17 ROR-γt dans 30 à 50 % des lymphocytes T CD4 + infiltrant les poumons, 25 à 40 % d'entre eux ont produit de l'IL-17 à la place (Fig. 1a, Note supplémentaire 1, Supplément figure 2). 6,5 souris infectées ont présenté une inflammation pulmonaire atténuée (Fig. 1b) et leurs cellules T CD4 + infiltrant les poumons ont acquis une fonction régulatrice au jour 6. Ces cellules ont supprimé la prolifération stimulée par le peptide HA de cellules T CD4 + apparentées naïves in vitro (Fig. 1b) . 6,5 souris infectées ont perdu un poids corporel important au jour 3. Elles se sont remises de la perte de poids et toutes les souris ont survécu à l'infection (Fig. 1c). Il n'y avait pas de virus vivant dans les poumons au jour 9 (Fig. 1c).

L'IL-17 (interleukine-17A) est une cytokine pro-inflammatoire bien connue qui contribue à la pathogenèse de nombreuses maladies inflammatoires11,12,13,14,15,16. Mais, une réponse importante à l'IL-17 des lymphocytes T CD4 + infiltrant les poumons est associée à une inflammation pulmonaire atténuée ici chez les 6,5 souris infectées. Le soulagement de l'inflammation pulmonaire et la protection contre l'infection par le virus de la grippe ont été perdus chez les souris knock-out IL-17 (KO) 6,5. Avec 2,5 × 103 pfu de virus de la grippe PR8, les souris IL-17KO 6,5 ont contracté une maladie grave. Les lymphocytes T IL-17KO CD4 + et CD8 + infiltrant les poumons ont produit davantage de cytokines inflammatoires IFN-γ et TNF-α au jour 6 (Fig. 1d).

Les lymphocytes T CD4+ activés se développent d'abord, suivis d'une contraction du pool de cellules. L'activation induite par le virus de la grippe des cellules T 6, 5 CD4 + naïves spécifiques à HA transférées de manière adoptive a également suivi une tendance similaire chez les souris infectées de type sauvage (souris WT + 6, 5 cellules) au cours de nos expériences. Le pool de 6,5 cellules du donneur s'est initialement développé puis s'est contracté dans les poumons de souris de type sauvage (Fig. 2a). En revanche, la population de lymphocytes T CD4+ infiltrant les poumons a diminué chez les 6,5 souris infectées au cours des 4 premiers jours. Il a ensuite commencé à augmenter et à revenir au niveau d'avant l'infection au jour 11 après l'infection (Fig. 2a). Les cellules du thymus de 6,5 souris, les nouveaux émigrants thymiques, peuvent reconstituer la population de lymphocytes T CD4+ infiltrant les poumons. Nous avons ainsi testé le profil d'expression de CD24 et Qa2 des lymphocytes T CD4+ infiltrant les poumons chez 6,5 souris infectées. Les thymocytes matures sont connus pour exprimer un niveau élevé de CD24 et un minimum de Qa2. Les lymphocytes T CD4+ ou CD8+ perdent CD24 et acquièrent des expressions Qa2 avec le temps après avoir été libérés à la périphérie24. Parmi les cellules T CD4 + infiltrant les poumons des souris infectées 6,5, nous avons trouvé une expression CD24 plus élevée et une expression Qa2 plus faible à la surface des cellules productrices d'IL-17 que des cellules productrices d'IFN-γ au jour 6 (Fig. 2a).

a Les émigrants thymiques récents sécrètent plus d'IL-17 et moins d'IFN-γ dans les poumons infectés de 6,5 souris : panneau de gauche : cinétique de la population de lymphocytes T CD4+ spécifiques à HA infiltrant les poumons chez 6,5 souris infectées. Les souris WT avec des cellules transférées de manière adoptive ont servi de témoins, comme décrit dans le texte. Panneaux du milieu et de droite : profils d'expression CD24 et Qa2 de l'IL-17 ou de l'IFN-γ produisant des lymphocytes T CD4+ infiltrant les poumons chez 6,5 souris infectées. b–d La thymectomie abolit l'apport d'émigrants thymiques récents et les souris 6,5 thymectomisées souffrent d'une maladie grave avec moins de production d'IL-17 : b Production d'IL-17 et d'IFN-γ avec ROR-γt et T-bet induction d'HA- infiltrant les poumons lymphocytes T CD4+ spécifiques et c Charge virale dans les poumons au jour 7. d Perte de poids corporel après infection. Des souris 6,5 non thymectomisées ont servi de témoins. Les souris WT avec des cellules transférées de manière adoptive ont servi d'autre groupe de souris témoins, comme décrit dans le texte. Les histogrammes et les dot-plots sont représentatifs, et les autres valeurs sont des moyennes ± sd d'au moins 3 expériences (n = 6/groupe ; ***p < 0,0001 ; valeurs P bilatérales pour le test t non apparié pour comparer deux groupes à un point de temps spécifique, ANOVA bidirectionnelle pour les courbes de poids corporel).

Pour valider la découverte ci-dessus qui suggère que les émigrants thymiques récents sont la source d'IL-17 dans les poumons de souris 6,5 infectées, nous avons effectué une thymectomie chez des souris 6,5 âgées de 2 semaines et avons infecté les souris 6,5 thymectomisées après 2 semaines de récupération de la chirurgie. La thymectomie est l'ablation chirurgicale de la glande thymus. Elle supprime ainsi l'apport d'émigrants thymiques. Après une infection par le virus de la grippe PR8 de 2, 5 × 103 pfu, 6, 5 souris thymectomisées présentaient moins d'induction de ROR-γt et de production d'IL-17 dans les cellules T CD4 + infiltrant les poumons au jour 7 (Fig. 2b). Les proportions de cellules productrices d'IFN-γ n'ont pas été modifiées par la thymectomie et environ 15% des cellules T CD4 + infiltrant les poumons ont produit de l'IFN-γ chez les 6, 5 souris thymectomisées et non thymectomisées à ce moment-là (Fig. 2b). En conséquence, la thymectomie a effacé la dominance de l'IL-17 chez les souris 6,5 infectées et a ramené la distribution entre l'IL-17 et l'IFN-γ à un schéma similaire à celui des cellules du donneur 6,5 chez les souris de type sauvage infectées (Fig. 2b). Avec cette réponse Th altérée, la thymectomie a entraîné une charge virale plus élevée dans les poumons (Fig. 2c) et aggravé la maladie avec une perte de poids corporel plus importante (Fig. 2d) chez les 6,5 souris infectées. Ces résultats corroborent nos découvertes qui suggèrent que Th17 est une réponse protectrice des émigrants thymiques récents chez 6,5 souris infectées.

L'involution thymique entraîne une diminution de l'offre d'émigrants thymiques avec l'âge. Semblable aux souris de type sauvage, il y avait environ 50 millions de thymocytes chez les souris 6,5 âgées de 4 semaines. Le nombre a diminué à 40 millions chez les souris de 8 semaines et 20 millions chez les souris 6,5 de 12 semaines. Il n'y avait que 10 millions de thymocytes chez les souris 6,5 âgées de 40 semaines (Fig. 3a). De plus, il y avait moins de cellules doubles positives CD4 + CD8 + dans les thymocytes CD3 + avec l'âge (Fig. 3b). L'infection par le virus de la grippe a induit moins de réponse Th17 chez les souris âgées de 6,5 ans que chez les jeunes souris de 6,5 ans. Environ 30 % des lymphocytes T CD4+ infiltrant les poumons ont produit de l'IL-17 chez des souris 6,5 âgées de 4 ou 8 semaines au jour 7 après l'infection avec 2,5 × 103 pfu du virus de la grippe PR8. Le nombre a diminué à moins de 20% chez les souris de 12 semaines et à environ 10% chez les souris 6,5 de 40 semaines (Fig. 3c, d). Cependant, le pourcentage de cellules productrices d'IFN-γ n'a pas changé avec l'âge et environ 10 à 12% des lymphocytes T CD4 + infiltrant les poumons ont produit de l'IFN-γ chez les souris 6,5 âgées de 4 à 40 semaines (Fig. 3c, d) . Comme le pourcentage de cellules productrices d'IFN-γ n'a pas changé avec l'âge, la dominance de l'IL-17 sur la production d'IFN-γ a également diminué avec l'âge (Fig. 3e). La charge virale dans les poumons était plus élevée chez les 6,5 souris âgées que jeunes au jour 7 après l'infection (Fig. 3f). Les souris âgées de 6,5 ans souffraient d'une maladie plus grave que les jeunes souris de 6,5 ans, avec une récupération retardée de la perte de poids (Fig. 3g).

a Nombre de thymocytes et b Pourcentage de cellules CD4 + CD8 + dans les thymocytes CD3 + chez 6,5 souris saines non infectées d'âges indiqués. c Les diagrammes à points et les graphiques à barres d affichent une diminution de l'IL-17 et maintiennent les réponses IFN-γ des lymphocytes T CD4 + spécifiques à l'HA infiltrant les poumons à l'âge de 6,5 souris au jour 7 après l'infection. e Perte de dominance de la réponse IL-17 sur la réponse IFN-γ des lymphocytes T CD4 + spécifiques à HA infiltrant les poumons avec un âge de 6, 5 souris au jour 7 après l'infection. f Charge virale plus élevée dans les poumons au jour 7 après l'infection et g récupération retardée de la perte de poids corporel avec l'âge chez 6,5 souris infectées. Les dot-plots sont représentatifs, et les autres valeurs sont des moyennes ± sd d'au moins 3 expériences (n = 6/groupe ; ***p < 0,0001 ; *p < 0,01 ; NS non significatif, p > 0,05 ; P bilatéral valeurs pour le test t non apparié pour comparer deux groupes à un moment précis, ANOVA à deux voies pour les courbes de poids corporel).

Nous avons conçu une expérience avec deux transferts adoptifs de cellules T 6, 5 CD4 + naïves spécifiques à HA dans des souris infectées de type sauvage (souris WT + 2 lots de 6, 5 cellules) pour imiter des émigrants thymiques séquentiels chez 6, 5 souris (Fig. 4a). Les cellules du donneur 6,5 transférées avec infection se sont différenciées en cellules Th1 productrices d'IFN-γ, et les cellules du donneur 6,5 transférées 4 jours plus tard se sont différenciées en cellules Th17 productrices d'IL-17 au jour 8 après l'infection dans les poumons de souris de type sauvage (Fig. 4a–c, Note supplémentaire 2, Fig. 3 supplémentaire). En présence de cellules Th1 issues du premier transfert, 30% des cellules du second transfert produisaient de l'IL-17 et seulement moins de 2% produisaient de l'IFN-γ. Environ 5% des cellules productrices d'IL-17 ont également produit de l'IFN-γ (Fig. 4d). Les deuxièmes cellules de transfert ont également modifié le phénotype des premières cellules de transfert. Il y avait une réduction de 40% de la production d'IFN-γ au jour 8 après l'infection (Fig. 4d). Dans les contrôles de transfert unique (souris WT + cellules 6,5 en un seul lot), les cellules du donneur 6,5 transférées avec infection ou au jour 4 après l'infection étaient des cellules Th1 productrices d'IFN-γ proéminentes au jour 8 après l'infection dans les poumons de souris de type sauvage . Il n'y avait qu'une diminution marginale de la production d'IFN-γ et une augmentation marginale de la production d'IL-17 des cellules transférées au jour 4 par rapport aux cellules transférées avec infection. (Fig. 4).

a Panneaux de gauche : schéma de principe d'une expérience de transfert adoptif de cellules T CD4+ spécifiques à HA naïves en deux lots chez des souris de type sauvage infectées, comme décrit dans le texte. Panneaux de droite : réponse Th17 des cellules du deuxième lot en présence des cellules du premier lot dans les poumons de souris de type sauvage infectées avec transfert de cellules en deux lots. b Production d'IL-17 et d'IFN-γ des cellules du premier et du deuxième lot au jour 8 dans les poumons de souris de type sauvage infectées avec un transfert de cellules T CD4 + spécifiques à HA en un ou deux lots. d Coproduction d'IFN-γ par les lymphocytes T CD4+ spécifiques de HA du deuxième lot produisant de l'IL-17 au jour 8 en présence ou en l'absence de lymphocytes T CD4+ spécifiques de HA du premier lot transférés de manière adoptive. e Coproduction d'IFN-γ par les cellules T CD4 + spécifiques de HA du premier lot produisant de l'IL-17 en présence ou en l'absence des cellules du second lot à ce moment-là. Les dot-plots sont représentatifs, et les autres valeurs sont des moyennes ± sd d'au moins trois expériences (n = 6/groupe ; ***p < 0,0001 ; *p < 0,01 ; NS non significatif, p > 0,05 ; P bilatéral valeurs pour le test t non apparié).

Dans l'expérience de souris de type sauvage avec deux transferts adoptifs de cellules T 6,5 CD4+ naïves spécifiques de HA (souris WT + 2 lots de 6,5 cellules), la réponse Th17 productrice d'IL-17 du deuxième donneur de transfert 6,5 cellules a été associée avec une dominance réduite de T-bet sur ROR-γt (Fig. 5a, b). Il y avait une transduction du signal TCR comparable de la phosphorylation de ZAP-70 à l'induction du facteur de transcription Th1 caractéristique T-bet dans les cellules du donneur 6,5 des deux transferts (Fig. 5c). Avec l'induction substantielle de T-bet, il y a eu une forte activation du facteur de transcription ROR-γt associé à Th17 dans les cellules 6.5 du donneur du deuxième transfert (Fig. 5d). Les 6,5 cellules du donneur du deuxième transfert ont produit de l'IL-17 au lieu de l'IFN-γ avec une dominance réduite de T-bet sur ROR-γt (Fig. 5b – d). De plus, il y avait une expression plus élevée du marqueur de cellule T régulateur induit (iTreg) LAG-3 dans les cellules 6,5 du donneur du deuxième transfert (Fig. 5e).

a Diagramme schématique et réponse Th17 avec b dominance réduite de T-bet sur ROR-γt des cellules donneuses du deuxième lot dans l'expérience de transfert adoptif de cellules T CD4 + naïves spécifiques à HA en deux lots chez des souris de type sauvage infectées. c Force comparable de la signalisation TCR de la phosphorylation de ZAP70 à l'induction de T-bet dans les cellules Th1 du premier lot et Th17 du deuxième lot dans les poumons au jour 8 après l'infection. Les nombres représentent le MFI (intensité moyenne de fluorescence) des molécules indiquées. d Taille de la population Foxp-3+ inchangée avec une activation ROR-γt plus élevée du deuxième lot par rapport aux cellules donneuses du premier lot au jour 8. e Expression plus élevée du marqueur iTreg LAG-3 à la surface du deuxième lot par rapport à les cellules du donneur du premier lot à ce moment-là. f Récupération facilitée de la perte de poids corporel et amélioration de la survie des souris de type sauvage infectées avec deux lots de transfert adoptif de lymphocytes T CD4 + spécifiques à HA naïfs que les souris avec un transfert de cellules apparentées en un seul lot. g Pathologie pulmonaire brute et scores pathologiques des sections pulmonaires, et h Charge virale dans les poumons de souris de type sauvage infectées avec deux lots de transfert adoptif de lymphocytes T CD4 + spécifiques à HA naïfs que les souris avec un transfert de cellules apparentées en un seul lot. Les photographies, les histogrammes et les dot-plots sont représentatifs, et les autres valeurs sont des moyennes ± sd d'au moins trois expériences (n = 6/groupe ; ***p < 0,0001 ; **p < 0,001 ; *p < 0,01 ; NS non- significatif, p > 0,05 ; valeurs P bilatérales pour le test t non apparié pour comparer deux groupes à un moment précis, ANOVA à deux facteurs pour les courbes de poids corporel et test de Gehan-Breslow-Wilcoxon pour les courbes de survie).

Les deux transferts adoptifs de cellules du donneur 6,5 ont aidé les souris de type sauvage receveuses à se remettre plus efficacement de l'infection avec une meilleure survie, par rapport aux souris avec un seul transfert de cellules du donneur 6,5 (Fig. 5f). Une protection améliorée était là avec moins de pathologie (Fig. 5g) et une charge virale plus faible dans les poumons au jour 8 après l'infection (Fig. 5h).

Nous avons en outre défini le rôle protecteur de l'IL-17 à partir des cellules du deuxième lot dans l'expérience avec deux transferts adoptifs, en utilisant des cellules donneuses 6,5 de souris naïves IL-17KO 6,5 dans le deuxième transfert adoptif ((souris WT + 1er lots 6,5 cellules + 2e lot de cellules IL-17KO 6,5 ; Fig. 6a). Le remplacement des cellules du deuxième transfert par des cellules IL-17KO donneur 6,5 a aboli la protection avec deux transferts de cellules IL-17 donneur 6,5 compétentes (Fig. 6b). Malgré une élimination facilitée du virus avec les cellules donneuses IL-17KO 6.5 (Fig. 6c), les souris souffraient d'une maladie aggravée avec une mortalité plus élevée avec moins d'IL-17 (Fig. 6d, f) et une production plus inflammatoire d'IFN-γ dans les cellules donneuses 6.5 des deux transferts ( Fig. 6e, f).

a Diagramme schématique et b protection perdue de l'expérience de transfert adoptif en deux lots chez des souris de type sauvage infectées avec le transfert adoptif de cellules T CD4 + spécifiques à IL-17KO HA naïves dans le deuxième lot. c Charge virale au jour 8 dans les poumons de souris de type sauvage infectées dans une expérience de transfert de lymphocytes T CD4 + spécifiques à l'HA naïve en deux lots, avec des cellules de second lot compétentes pour l'IL-17KO ou l'IL-17. d Production d'IL-17 inchangée par les cellules du premier lot et e production accrue d'IFN-γ par les cellules du premier et du deuxième lot avec le transfert de lymphocytes T CD4 + spécifiques à l'IL-17KO HA naïf du deuxième lot. f Parcelles de points représentatives de la production d'IL-17 et d'IFN-γ par les cellules du premier et du deuxième lot avec le transfert de lymphocytes T CD4 + naïfs compétents en IL-17 ou IL-17KO HA spécifiques. Les valeurs sont des moyennes ± écart type d'au moins trois expériences (n = 6/groupe ; ***p < 0,0001 ; *p < 0,01 ; NS non significatif, p > 0,05 ; valeurs P bilatérales pour le test t non apparié à comparer deux groupes à un moment précis et test de Gehan–Breslow–Wilcoxon pour les courbes de survie).

La neuraminidase du virus de la grippe PR8 active le TGF-β des lymphocytes T CD4+ spécifiques de HA18, et le TGF-β est une cytokine indispensable à la polarisation Th17 in vitro25. Des cellules T 6, 5 CD4 + spécifiques à HA naïves ont été transférées de manière adoptive dans des souris de type sauvage (souris WT + 6, 5 cellules) et les souris ont été infectées par 2, 5 × 103 pfu de virus PR8. Les cellules 6,5 du donneur infiltrant les poumons avaient activé le TGF-β au jour 4 après l'infection chez des souris de type sauvage (Fig. 7a). Ils ont été récupérés à partir des souris receveuses à ce moment-là pour une co-culture avec des lymphocytes T naïfs 6,5 CD4+ in vitro. Sans co-culture, les 6,5 lymphocytes T CD4+ naïfs étaient des lymphocytes Th1 et 16 % d'entre eux produisaient de l'IFN-γ après 48 h de stimulation avec le virus PR8 in vitro. Lorsqu'elles ont été co-cultivées avec les cellules 6,5 du donneur infiltrant les poumons au jour 4, les cellules T naïves 6,5 CD4 + ont été biaisées en cellules Th17. Environ 20% d'entre eux ont produit de l'IL-17 et seulement 7% d'entre eux ont produit de l'IFN-γ (Fig. 7b). Le TGF-β de souris recombinant augmenté et l'anticorps anti-TGF-β ont atténué la production d'IL-17 des 6, 5 lymphocytes T CD4 + (Fig. 7c). Le virus de la vaccine porteur de HA (Vac-HA) a activé le transfert adoptif de cellules T 6,5 CD4+ naïves spécifiques de HA in vivo à une amplitude comparable à celle du virus de la grippe PR8. Comme Vac-HA n'a pas de neuraminidase, les cellules du donneur 6,5 n'ont pas obtenu de TGF-β activé. Après récupération des souris receveuses au jour 4, ces cellules 6,5 du donneur infiltrant les poumons activés par Vac-HA n'ont pas biaisé les cellules Th1 en cellules Th17 dans la culture in vitro (Fig. 7).

une activation du TGF-β dans les lymphocytes T CD4+ spécifiques de HA par le virus de la grippe, mais pas par le virus de la vaccine à insertion HA (Vac-HA). Panneau supérieur : des splénocytes de souris 6,5 transgéniques TCR spécifiques à HA ont été stimulés pendant la nuit avec le virus de la grippe ou Vac-HA. Panneau inférieur : des souris de type sauvage ont reçu un transfert adoptif de lymphocytes T CD4+ spécifiques à HA naïfs avec une infection par le virus de la grippe ou Vac-HA, et les cellules pulmonaires ont été analysées au jour 4. b Les cellules pulmonaires du jour 4 ont été mélangées avec des splénocytes naïfs de cellules spécifiques à HA Souris transgéniques TCR 6,5 et stimulées avec le virus de la grippe pendant 48 h in vitro. c L'ajout de TGF-β de souris recombinant boosté et d'anticorps anti-TGF-β de souris a atténué la production d'IL-17 par les cellules T CD4 + spécifiques de HA dans la co-culture. Les histogrammes et les dot-plots sont représentatifs.

Dans notre rapport précédent, nous avons démontré une activation accrue du TGF-β des cellules T CD4 + spécifiques à HA en l'absence d'IL-1018. Ici, nous avons essayé deux transferts de cellules donneuses IL-10KO 6,5 dans des souris IL-10KO (souris IL-10KO + 2 lots de cellules IL-10KO 6,5 ; ensemble IL-10KO), premier transfert avec infection par le virus de la grippe PR8 et deuxième transfert 4 jours après l'infection. Deux transferts de cellules donneuses 6,5 compétentes pour l'IL-10 dans des souris de type sauvage (souris WT + 2 lots de 6,5 cellules; ensemble WT) ont servi de témoins (Fig. 8a, Note complémentaire 3, Fig. 4 complémentaire). Il y avait plus de TGF-β actif dans les 6,5 cellules du donneur IL-10KO du premier transfert dans le cadre de l'IL-10KO sans IL-10, par rapport aux 6,5 cellules du donneur compétent en IL-10 du premier transfert dans le cadre WT avec IL-10 (figure 8b). De plus, il y avait plus d'IL-17 dans les 6,5 cellules du donneur IL-10KO du deuxième transfert dans le cadre de l'IL-10KO sans IL-10, par rapport aux 6,5 cellules du donneur compétent en IL-10 du deuxième transfert dans le cadre WT avec IL-10. Environ 60 % des secondes cellules de transfert ont produit de l'IL-17 en l'absence d'IL-10 au jour 8 après l'infection, contre 25 % dans le cadre de l'IL-10 (Fig. 8c), et la production d'IL-17 du Les cellules de deuxième transfert étaient liées à la protection contre l'infection par le virus de la grippe chez les souris IL-10KO (Note complémentaire 3, Fig. 4 supplémentaire).

a–c Expérience de transfert adoptif en deux lots en l'absence d'IL-10. a Diagramme schématique : des cellules T CD4 + spécifiques à IL-10KO naïves ont été transférées de manière adoptive dans des souris IL-10KO aux jours 0 et 4 après l'infection (ensemble IL-10KO). Des souris WT infectées avec des lymphocytes T CD4 + spécifiques de HA compétents pour IL-10 (ensemble WT) ont servi de contrôle. b Plus de TGF-β des cellules donneuses IL-10KO du premier lot et c réponse Th17 intensifiée des cellules donneuses IL-10KO du deuxième lot dans IL-10KO au jour 8. d, e Expérience de transfert adoptif en deux lots dans la nature souris de type infectées par le virus de la vaccine à insertion HA (Vac-HA). d Pas de réponse Th17 des cellules donneuses du deuxième lot chez les souris infectées par Vac-HA. Les histogrammes et les dot-plots sont représentatifs, et les autres valeurs sont des moyennes ± sd d'au moins trois expériences (n = 6/groupe ; ***p < 0,0001 ; valeurs P bilatérales pour le test t non apparié).

Nous avons ensuite effectué une expérience similaire à deux transferts dans le cadre du WT (souris WT + 2 lots de 6, 5 cellules) avec le virus de la vaccine à insertion HA (Vac-HA) au lieu de l'infection par le virus de la grippe PR8 (Fig. 8d). Les cellules du donneur 6,5 des deux transferts, transférées avec infection et transférées au jour 4, ont été activées en phénotype Th1 par l'infection Vac-HA, comme prévu avec l'absence de TGF-β actif sur les cellules du donneur 6,5 du premier transfert (Fig. 8e).

La signalisation de l'IL-17 via son récepteur bien connu IL-17RA contribue à l'inflammation26. Le récepteur du facteur de croissance épidermique (EGFR ; ErbB-1 ; HER1) a été décrit comme un récepteur non canonique pour l'IL-17. Il a été démontré que la signalisation de l'IL-17 avec l'EGFR participe au processus de cicatrisation des plaies27. Nous avons infecté 6,5 souris avec 2,5 × 103 pfu de la souche PR8 du virus de la grippe. Des souris de type sauvage ont reçu un transfert adoptif de cellules donneuses naïves 6,5 infectées (souris WT + 6,5 cellules ; ensemble WT) et des souris IL-17KO ont reçu un transfert adoptif de cellules donneuses naïves IL-17KO 6,5 infectées (souris IL-17KO + IL-17KO 6,5 cellules ; ensemble IL-17KO). Il y avait une régulation à la hausse de l'IL-17RA et de l'EGFR sur les lymphocytes T CD4 + infiltrant les poumons chez 6,5 souris après l'infection par le virus de la grippe. L'IL-17RA n'a été régulé positivement qu'au jour 3 après l'infection, mais pas par la suite. L'EGFR a été progressivement régulé du jour 3 au jour 6 et au jour 9 après l'infection (Fig. 9a). L'EGFR était plus abondant que l'IL-17RA à la surface des cellules du jour 6 au jour 9 après l'infection (Fig. 9b). La régulation à la hausse de l'IL-17RA et de l'EGFR était également présente sur les cellules du donneur infiltrant les poumons 6,5 et IL-17KO 6,5 de l'ensemble WT et de l'ensemble IL-17KO, respectivement (Fig. 9a, b, Note complémentaire 4, Fig. 5 supplémentaire) . Cependant, il y avait une dominance de l'EGFR sur l'IL-17RA sur les surfaces des lymphocytes T CD4 + infiltrant les poumons au jour 6, mais pas au jour 9 dans l'ensemble WT. Il n'y avait pas de dominance de l'EGFR sur l'IL-17RA aux jours 6 et 9 dans l'ensemble IL-17KO (Fig. 9b).

a Expressions de l'EGFR et de l'IL-17RA à la surface des lymphocytes T CD4+ infiltrant les poumons chez des souris 6,5 transgéniques TCR infectées, des souris de type sauvage et des souris IL-17KO. Des souris saines non infectées (naïves) ont servi de témoins. Les graphiques à barres affichent la régulation à la hausse ou à la baisse des expressions de l'EGFR et de l'IL-17RA avec le temps après l'infection chez ces souris. b Abondance d'EGFR par rapport à l'IL-17RA à la surface des lymphocytes T CD4+ infiltrant les poumons aux jours 6 et 9 après l'infection chez 6,5 souris. c Phosphorylation plus élevée de l'EGFR des lymphocytes T CD4 + infiltrant les poumons chez les 6, 5 souris infectées aux jours 6 et 9. d - e Phosphorylation de l'EGFR dans les 6, 5 lymphocytes T CD4 + après 48 h de stimulation avec 0, 03 MOI PR8 virus in vitro. Des splénocytes de souris naïves compétentes en IL-17 et IL-17KO 6.5 ont été stimulés, et des splénocytes de souris de type sauvage ont servi de témoins. De l'IL-17 recombinante de souris (0,1 ou 1,0 μg/ml) ou du Gefitinib (1,0 μM) a été ajouté à la condition de culture, comme indiqué dans le texte. f Dominance de TRAF4 sur TRAF6 dans les poumons de 6,5 souris infectées, contrairement à la dominance de TRAF6 sur TRAF4 dans les poumons de souris infectées de type sauvage et IL-17KO, déterminée par les niveaux d'ARNm dans les lymphocytes T CD4+ infiltrant les poumons et décrit dans le texte. g Coloration intracellulaire de TRAF4 dans les 6,5 lymphocytes T CD4+ après 48 h de stimulation avec 0,03 MOI PR8 virus in vitro. Des splénocytes de souris naïves compétentes en IL-17 et IL-17KO 6.5 ont été stimulés, et des splénocytes de souris de type sauvage ont servi de témoins. De l'IL-17 recombinante de souris (0,1 ou 1,0 μg/ml) ou du Gefitinib (1,0 μM) a été ajouté à la condition de culture, comme indiqué dans le texte. h Co-localisation de l'EGFR et du TRAF4 dans les lymphocytes T 6.5, IL-17KO 6.5 et CD4+ de type sauvage après 48 h de stimulation avec 0,03 MOI PR8 virus in vitro. Les histogrammes et les photographies sont représentatifs, et les autres valeurs sont des moyennes ± sd d'au moins trois expériences. (n = 6/groupe ; ***p < 0,0001 ; NS non significatif, p > 0,05 ; valeurs P bilatérales pour le test t non apparié).

6,5 souris infectées avaient une abondance d'EGFR à la surface des lymphocytes T CD4 + infiltrant les poumons, et elle était associée à une phosphorylation plus élevée de l'EGFR au jour 9 qu'au jour 6 et au jour 3. En revanche, seul un EGFR phosphorylé au niveau de base a été détecté. dans le donneur infiltrant les poumons, 6,5 cellules de l'ensemble WT et les cellules du donneur IL-17KO de l'ensemble IL-17KO aux jours 3, 6 et 9 (Fig. 9c). Lors de la stimulation de splénocytes de souris naïves 6,5, de souris IL-17KO 6,5 ou de souris WT avec 0,03 MOI de virus de la grippe pendant 48 h in vitro, il y avait plus de phosphorylation EGFR de 6,5 lymphocytes T CD4+ que celle des lymphocytes T IL-17KO 6,5 CD4+ ( figure 9d). Le supplément d'IL-17 a augmenté la phosphorylation de l'EGFR des cellules T IL-17KO 6.5 CD4 + de manière dose-dépendante, plus d'augmentation avec 1, 0 que 0, 1 μg / ml d'IL-17 de souris recombinante (Fig. 9e). L'inhibiteur de l'EGFR, le géfitinib, a atténué la phosphorylation de l'EGFR des cellules T 6,5 CD4 + et la phosphorylation de l'EGFR induite par l'IL-17 des cellules T IL-17KO 6,5 CD4 + (Fig. 9e). Les lymphocytes T CD4 + de type sauvage de souris WT naïves ont servi de témoins, dans lesquels le supplément d'IL-17 a augmenté et le géfitinib a atténué la phosphorylation de l'EGFR (Fig. 9e).

La famille des facteurs associés au récepteur du facteur de nécrose tumorale (TRAF) (TRAF 1 à 7) de sept protéines d'échafaudage est impliquée dans divers processus physiologiques cellulaires28. Les TRAF, en tant que molécules adaptatrices, modèrent de nombreuses voies de signalisation. TRAF4 et TRAF6 partagent les mêmes sites de liaison TRAF, mais ils jouent des rôles différents dans la pathogenèse29,30. Une étude quantitative en temps réel par PCR de transcription inverse des cellules pulmonaires du jour 6 a révélé une régulation à la hausse de TRAF4 et TRAF6 chez les 6,5 souris infectées. Le TRAF4 était dominant sur le TRAF6 dans les lymphocytes T CD4 + infiltrant les poumons de 6,5 souris infectées (Fig. 9f). En revanche, TRAF6 était dominant sur TRAF4 dans les lymphocytes T CD4 + 6,5 donneurs infiltrant les poumons de type sauvage infecté (souris WT + 6,5 cellules; ensemble WT) ou donneur IL-17KO 6,5 lymphocytes T CD4 + de souris IL-17KO infectées (IL -Souris 17KO + cellules IL-17KO 6,5 ; ensemble IL-17KO ; figure 9f). Lors d'une stimulation in vitro similaire, comme décrit ci-dessus, la cytométrie en flux a révélé plus de régulation à la hausse de la protéine TRAF4 dans les cellules T 6,5 que IL-17KO 6,5 CD4 + (Fig. 9g). Le supplément d'IL-17 a augmenté la régulation à la hausse de TRAF4 dans les cellules T IL-17KO 6,5 CD4 + d'une manière dépendante de la dose, plus d'augmentation avec 1, 0 que 0, 1 μg / ml d'IL-17 de souris recombinante (Fig. 9g). L'inhibiteur de l'EGFR, le géfitinib, a atténué la régulation à la hausse de TRAF4 dans les cellules T 6,5 CD4 + et la régulation à la hausse de TRAF4 induite par l'IL-17 dans les cellules T IL-17KO 6,5 CD4 + (Fig. 9g). Les lymphocytes T CD4 + de type sauvage de souris WT naïves ont servi de témoins, dans lesquels le supplément d'IL-17 a augmenté et le géfitinib a atténué la régulation à la hausse de TRAF4 (Fig. 9g).

La microscopie confocale a révélé une translocation de TRAF4 vers le complexe de signalisation EGFR dans les cellules T 6, 5 CD4 +, lors de la stimulation de splénocytes de souris naïves 6, 5 avec le virus de la grippe 0, 03 MOI pendant 48 h in vitro (Fig. 9h). La co-localisation de TRAF4 et d'EGFR était plus significative dans les lymphocytes T 6,5 CD4+ que celle des lymphocytes T IL-17KO 6,5 CD4+. Le supplément d'IL-17 a augmenté la co-localisation de TRAF4 et d'EGFR dans les cellules T IL-17KO 6.5 CD4 + stimulées (Fig. 9h). L'inhibiteur de l'EGFR, le géfitinib, a atténué la co-localisation de TRAF4 et d'EGFR dans les cellules T 6,5 CD4 + et la co-localisation de TRAF4 et d'EGFR induite par l'IL-17 dans les cellules T IL-17KO 6,5 CD4 + (Fig. 9h).

Le géfitinib est un inhibiteur de l'EGFR, qui interrompt la signalisation via le récepteur du facteur de croissance épidermique (EGFR) dans les cellules cibles. Le géfitinib a aggravé la maladie de l'infection par le virus de la grippe chez la souris. L'impact de l'inhibition de l'EGFR avec le géfitinib était le plus élevé chez les souris 6,5 infectées, modéré chez les souris de type sauvage infectées et négligeable chez les souris IL-17KO infectées (Fig. 10a). Chez les souris de type sauvage infectées, le supplément intranasal d'IL-17 a conféré une certaine protection, et la protection a été perdue avec le traitement au géfitinib (Fig. 10b). Le bénéfice perdu était associé à une régulation positive altérée de TRAF4 et TRAF6 dans les poumons. Le supplément d'IL-17 a modifié la dominance de TRAF6 sur TRAF4 dans les poumons de souris de type sauvage infectées, et l'altération a été limitée lorsque le supplément d'IL-17 a été administré avec un traitement au géfitinib (Fig. 10b).

une inhibition de l'EGFR avec le géfitinib a entraîné une plus grande perte de poids corporel et une mortalité plus élevée de 6,5 souris infectées par le virus de la grippe. Des souris infectées de type sauvage et IL-17KO ont servi de témoins. b Le traitement au géfitinib a également diminué la protection conférée par le supplément d'IL-17 et a entraîné une perte de poids corporel plus importante et une mortalité plus élevée des souris de type sauvage infectées. Les altérations étaient associées à une dominance modifiée de TRAF4 sur les niveaux d'ARNm de TRAF6. Les valeurs sont des moyennes ± sd d'au moins trois expériences. (n = 6/groupe ; ***p < 0,0001 ; NS non significatif, p > 0,05 ; valeurs P bilatérales pour le test t non apparié pour comparer deux groupes à un moment précis, ANOVA à deux facteurs pour le poids corporel et test de Gehan–Breslow–Wilcoxon pour les courbes de survie).

Ici, nous avons démontré que le TGF-β activé par le virus de la grippe des cellules Th1 guide l'évolution Th17 des émigrants thymiques récents. La signalisation de l'IL-17 via le récepteur non canonique de l'IL-17 EGFR active la protéine d'échafaudage TRAF4 plus que TRAF6 lors du soulagement de l'inflammation pulmonaire dans la grippe sévère. Les cellules T 6,5 CD4 + spécifiques de HA transférées de manière adoptive ont causé des dommages collatéraux avec leur réponse Th1 productrice d'IFN-γ à l'infection chez des souris de type sauvage. Les souris donneuses des cellules T 6,5 CD4+ spécifiques HA naïves, les souris transgéniques 6,5 TCR, ont toutes les cellules T CD4+ sensibles à l'antigène HA du virus de la grippe. La réponse écrasante des lymphocytes T CD4 + chez les 6,5 souris infectées causerait plus de dommages et une maladie plus grave. La maladie s'est d'abord aggravée, mais l'évolution ultérieure d'une réponse Th17 importante a atténué la maladie et les 6,5 souris ont eu une meilleure survie que les souris de type sauvage. Les lymphocytes T CD4 + Th1 et Th17 ont été activés pour l'engagement Th1 avec une signalisation TCR comparable de la phosphorylation de ZAP-70 à l'induction de T-bet. L'évolution de Th17 était associée à une régulation positive de ROR-γt et à une dominance réduite de T-bet sur ROR-γt. La thymectomie, des expériences sur des souris âgées et des expériences de transfert adoptif répétitif ont révélé que les lymphocytes T Th1 CD4 + guidaient l'évolution de Th17, associée au TGF-β activé par la neuraminidase virale sur les cellules Th1. La signalisation de l'IL-17 via l'EGFR s'est produite avec une abondance relative d'EGFR par rapport à l'IL-17RA chez 6,5 souris transgéniques CD4 + TCR. La signalisation active la protéine d'échafaudage TRAF4 plus que TRAF6. Le blocage du géfitinib a documenté l'importance de la signalisation de l'IL-17 via l'EGFR dans le soulagement de l'inflammation pulmonaire dans la grippe sévère.

L'IFNγ et l'IL-17 sont des constituants fondamentaux de la tempête de cytokines dans la grippe sévère avec pneumonie31. L'IFN-γ est une cytokine Th1 caractéristique essentielle à la clairance virale32. Dans notre système expérimental, les lymphocytes T CD4+ spécifiques à HA infiltrant les poumons produisent de l'IFN-γ en réponse à l'infection17,18. Le facteur de transcription T-bet dirige l'engagement vers la lignée Th1 et la production d'IFN-γ33,34. Ici, nous avons constaté que notre évolution Th17 était également précédée par l'engagement Th1 avec une force comparable de signalisation TCR de la phosphorylation de ZAP-70 à l'induction de T-bet. Le TGF-β est indispensable à la polarisation Th17 des lymphocytes T CD4+ naïfs in vitro25. Nous avons révélé que le TGF-β activé par la neuraminidase virale des cellules T CD4+ Th1 est essentiel pour l'évolution guidée par Th1 des cellules Th17. Les lymphocytes T Th1 CD4 + ont dirigé l'activation du facteur de transcription ROR-γt spécifique de Th17 et la production de la cytokine IL-17 spécifique de Th17.

Il a été démontré que le facteur de transcription Th1 T-bet supprime la différenciation Th2 et Th1735,36. Cependant, la coproduction d'IFN-γ et d'IL-17 a été détectée dans les lymphocytes T CD4+ humains25,37 et la coproduction d'IFN-γ et d'IL-10 a été documentée dans les lymphocytes T CD4+ murins18. Les niveaux d'expression relatifs des facteurs de transcription T-bet, GATA-3 et ROR-γt peuvent affiner un équilibre entre les différentes lignées du paradigme Th1/Th2/Th17 conventionnel. Une dominance diminuée de T-bet sur GATA-3 et ROR-γt efface la production d'IFN-γ de lymphocytes T CD4 + spécifiques à HA infiltrant les poumons dans notre système expérimental17. Ici, dans le même système expérimental de grippe sévère, nous avons démontré une différenciation Th17 avec une dominance diminuée de T-bet sur ROR-γt. Cette activation excessive de ROR-γt a conduit les cellules T CD4 + engagées par Th1 dans la lignée Th17 et aboli la production d'IFN-γ.

Le rôle de l'IL-17 restait incertain. L'IL-17 est liée à une inflammation localisée et pathogène dans certaines maladies auto-immunes, dans lesquelles l'IL-17 se lie à son récepteur canonique IL-17RA et active TRAF6 et la cascade de signalisation subséquente26,28,38. L'IL-17 est anti-inflammatoire dans d'autres maladies39,40,41. L'IL-17 est très polyvalente et a été impliquée dans d'autres conditions non pathogènes, notamment la réparation tissulaire et le cancer42, dans lesquelles l'IL-17 se lie à l'EGFR recruté dans le complexe récepteur et active TRAF4 et la cascade de signalisation ultérieure27,39. L'activation de TRAF4 peut restreindre les processus pathogènes médiés par l'IL-1730. Nos cellules Th17 spécifiques à HA étaient similaires aux cellules Th17 non pathogènes25, car elles ne produisent pas d'IFN-γ et ne stimulent pas l'inflammation. Il y avait également une signalisation via EGFR et une activation ultérieure de TRAF4. La réponse Th17 atténue l'inflammation dans notre modèle murin de grippe sévère.

Les personnes âgées sont plus à risque de contracter une grippe grave43. Ils ont également souffert d'une mortalité excessive pendant le SRAS et les pandémies de COVID-19 en cours44,45, https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/need-extra-precautions/index.html ; consulté le 23 août 2022. Leurs comorbidités contribuent à ce fait mais cela peut aussi impliquer le dérèglement du système immunitaire. L'involution thymique liée à l'âge et la diminution de la production thymique peuvent être le problème. À 50 ans, le thymus humain ne génère que 15 à 20 % des lymphocytes T par rapport aux jeunes. Il est presque incapable de fabriquer de nouvelles cellules T à l'âge de 65 ans (Réf : 46). L'involution thymique commence à partir de l'âge de trois mois chez la souris47. Les cellules Th17 atténuant la maladie présentaient les marqueurs de surface des émigrants thymiques récents. La thymectomie a aboli la réponse Th17 et la Th17 a diminué avec l'âge. Les personnes âgées peuvent souffrir d'une maladie grave en raison de la perte des cellules Th17 modifiant la maladie. Nos résultats sonnent l'alarme concernant la modulation de la réponse de l'IL-17 dans les infections graves des voies respiratoires. Nous devons être prudents pour éviter une manipulation inappropriée des cytokines car l'IL-17 n'est pas nécessairement toujours pro-inflammatoire.

Toutes les expériences impliquant des souris ont été réalisées conformément aux protocoles approuvés par le "Animal Care and Use Committee" de l'hôpital Chang Gung Memorial (numéro d'approbation : IACUC 2016030301). Le comité a certifié que toutes les expériences impliquant des souris ont été menées en stricte conformité avec la loi sur la protection des animaux par le Conseil de l'agriculture, Executive Yuan, Taiwan, ROC, et les directives contenues dans le Guide pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire, tel que promulgué par l'Institute of Laboratory Animal Resources, National Research Council, États-Unis

Toutes les souris avaient un fond génétique C57BL/10.D2, et des souris des deux sexes âgées de 8 à 12 semaines, sauf dans les expériences avec des souris âgées, ont été utilisées pour les expériences. La lignée de souris transgéniques TCR 6.5 exprime un TCR reconnaissant un épitope HA restreint à I-Ed (110SFERFEIFPKE120) de HA du virus de la grippe PR8 (généreusement fourni par H. Von Boehmer, Harvard University, Boston, MA). Les 6,5 souris ont été croisées avec des souris syngéniques IL17KO ou IL10KO pour générer respectivement 6,5 souris transgéniques IL17KO TCR ou 6,5 souris transgéniques IL10 KO TCR. Des souris syngéniques IL17KO ont été générées en croisant des souris IL17KO de fond génétique B6 (généreusement fournies par YC. Day, Chang Gung Memorial Hospital, Taïwan) avec des souris de fond génétique C57BL/10.D2 pendant > 9 générations. Des souris transgéniques syngéniques IL10 KO et 6,5 IL10 KO TCR ont été décrites précédemment18. Les souris ont été maintenues dans des conditions spécifiques exemptes d'agents pathogènes.

La souche PR8 (A/PR/8/34) du virus de la grippe a été produite dans le liquide allantoïdien d'œufs de poule embryonnés âgés de 10 jours et caractérisée par une installation centrale à l'Université Chang Gung, à Taïwan. Les souris ont été inoculées par voie intranasale pendant une anesthésie légère à l'isoflurane (Aesica Queenborough Ltd., Kent, Royaume-Uni) avec 2,5 × 103 unités formant plaque (pfus) dans 50 μl de PBS17,18,19,20,21,22,34.

Le virus de la vaccine à insertion HA48,49,50 a été amplifié en utilisant des cellules BCS-1. Une dose infectieuse de 1 × 106 unités formant plaque (pfus) a été injectée par voie intrapéritonéale dans 100 μl de PBS.

L'IL-17A de souris recombinante (sans support) a été achetée auprès de BioLegend (San Diego, CA, USA; Cat # 576006). Une concentration appropriée d'IL-17A dans 20 ul de PBS a été complétée quotidiennement par voie intranasale pendant 5 jours pendant l'anesthésie à l'isoflurane (Aesica Queenborough Ltd., Kent, Royaume-Uni).

L'inhibiteur de l'EGFR Gefitinib a été acheté chez AstraZeneca. Une solution mère dans du DMSO a d'abord été préparée et des aliquotes ont été conservées à -80 ° C. Une solution finale fraîche a été préparée chaque jour dans du PBS et 100 mg/kg de Gefitinib dans 100 µl ont été administrés par gavage oral.

Des cellules T transgéniques CD4 + TCR clonotypiques spécifiques à HA ont été préparées à partir de rate et de ganglions lymphatiques regroupés de souris 6,5 transgéniques CD4 + TCR spécifiques à HA17, 18, 19, 20, 21, 22, 34, 48, 49. Des lymphocytes T clonotypiques IL17 KO ou IL10 KO HA spécifiques CD4 + TCR transgéniques ont été préparés à partir de rate et de ganglions lymphatiques regroupés de 6, 5 souris transgéniques IL17 KO ou 6, 5 IL10 KO TCR, respectivement. Les pourcentages clonotypiques ont été déterminés par analyse cytométrique en flux. Le phénotype naïf a été confirmé en évaluant les profils des marqueurs d'activation CD44 (anti-souris CD44 ; 553133, BD Biosciences ; dilution = 1 sur 100) et CD62L (anti-souris CD62L ; 553150, BD Biosciences ; dilution = 1 sur 100). Des cellules T 6,5 CD4+ répondant à l'infection ont été extraites des poumons de souris 6,5 transgéniques CD4+ TCR infectées spécifiques de HA. Les lymphocytes T CD4+ ont été enrichis par sélection négative à l'aide de billes magnétiques, et les cellules donneuses ont été identifiées à l'aide d'anticorps conjugués au fluorochrome contre CD90.1 (Thy1.1 ; anti-souris CD90.1 ; 554898, BD Biosciences ; dilution = 1 sur 1000) ou CD90.2 (Thy1.2 ; anti-souris CD90.2 ; 553006 ; BD Biosciences ; dilution = 1 sur 200). Pour les expériences de transfert en un seul lot, 2, 5 × 106 cellules T clonotypiques 6, 5 CD4 + ont été injectées via la veine caudale à des souris destinataires de type sauvage Thy1.2 / Thy1.2 + dans 0, 2 ml de solution saline équilibrée de Hank (HBSS). Pour les expériences de transfert en deux lots, un premier lot de 0,5 × 106 cellules T clonotypiques 6,5 CD4+ a été injecté au moment de l'infection, et un deuxième lot de 1,5 × 106 cellules T clonotypiques 6,5 CD4+ a été injecté au jour 4 de l'infection dans Thy1. Souris de type sauvage 2/Thy1.2+.

Les cellules T clonotypiques (1 × 107 cellules / ml) ont été colorées avec 5 μM de CFSE (5, 6-carboxyfluorescéine diacétatesuccinimidyl ester; Molecular Probes, Eugene, OR, USA) dans du HBSS pendant 10 min. Les cellules ont été lavées trois fois avec du HBSS et des cellules T 6, 5 CD4 + colorées au CFSE (2, 5 × 106) ont été transférées via la veine caudale chez des souris receveuses.

Les suspensions cellulaires ont été incubées sur de la glace avec des concentrations saturées de mAbs marqués au fluorochrome dans un tampon FACS (PBS plus 0,5 % de BSA et 0,02 % de NaN3) comme recommandé par les fabricants. Les lymphocytes T CD4+ du donneur ont été identifiés à l'aide des mAb suivants : anti-clonotypique 6,5 TCR conjugué à la biotine (fourni par H. Von Boehmer ; dilution = 1 sur 100), avidine-PE (A1204, Caltag, Burlingame, CA ; dilution = 1 sur 200), ou Streptavidin-APC (SA 1005, Caltag, Burlingame, CA ; dilution = 1 sur 200) et PerCP ou anti-CD4 conjugué au FITC (553052 ou 553047, BD Biosciences ; dilutions = 1 sur 100 pour les deux). Tous les anticorps conjugués au fluorochrome provenaient de BD Biosciences, à l'exception de T-bet et du contrôle d'isotype IgG1κ de souris (45–5825, 45–4714, eBiosciences ; dilution = 1 sur 50 pour les deux), FITC-Phospho-EGFR (Tyr1068) Lapin anti-humain, souris (MA5-27995, Invitrogen ; dilution = 1 sur 10) et PE-TRAF4 (SC-390232, Santa Cruz Biotechnology ; pas de dilution). Les cellules ont été acquises à l'aide de FACS CALIBUR et l'analyse a été effectuée à l'aide du logiciel CellQuest Pro (BD Biosciences), FACSuite (BD Biosciences) ou FlowJo (Tree Star, Inc.).

Des suspensions de cellules individuelles (5–10 × 106 cellules puits-1 dans des plaques de 24 puits) provenant d'organes prélevés ont été restimulées pendant 5 h avec 10 μg ml-1 peptide HA restreint au CMH de classe II (SFERFEIFPKE) en présence de 5 μg ml -1 Bréfeldine A (SI-B7651, Sigma-Aldrich). La concentration de Brefeldin-A a été maintenue tout au long de la coloration des cytokines intracellulaires. Les cellules restimulées ont été colorées en surface avec des anti-CD90.1 et des anti-CD4 comme décrit ci-dessus, fixées dans un tampon de fixation IC (00–8222, eBiosciences), lavées et colorées dans un tampon de perméabilisation (00–8333, eBiosciences) contenant anticorps conjugués au fluorochrome contre les cytokines cibles. Pour Foxp3 (11–5773, eBiosciences ; dilution = 1 sur 50) et T-bet, les cellules ont été colorées en surface, fixées et perméabilisées dans un tampon de fixation/perméabilisation (00-5523, eBiosciences), lavées et colorées dans un tampon de perméabilisation (00-8333, eBiosciences) contenant des anticorps conjugués au fluorochrome. Dans certaines expériences, les cellules ont été analysées ex vivo et colorées sans re-stimulation.

Des suspensions de cellules individuelles ont été préparées à partir de la rate de souris 6,5 transgéniques TRC spécifiques à HA. Les splénocytes (2,5 × 105) ont été restimulés pendant 72 h avec le peptide HA restreint de classe II (SFERFEIFPKE) à 37 °C en présence de 5 % de CO2. De la thymidine tritiée a été ajoutée 18 h avant la récolte. La quantité de radioactivité incorporée dans l'ADN dans chaque puits a été mesurée dans un compteur à scintillation, comme décrit précédemment17,34. Nous avons co-cultivé des lymphocytes T CD4 + spécifiques à HA infiltrant les poumons récupérés chez des souris infectées, comme décrit dans le texte, pour mesurer leur impact sur la prolifération.

Pour la production de cytokines, des suspensions unicellulaires de splénocytes (2,5 × 106 cellules par puits) provenant de souris 6,5 compétentes en IL-17 (IL-17+/+) ont été stimulées avec le virus de la grippe (souche PR8 ; 0,03 (MOI) Multiplicité d'infection ) dans du RPMI-1640 complet pendant 48 h in vitro, en présence de lymphocytes T 6,5 CD4+ spécifiques à HA infiltrant les poumons provenant de souris infectées au jour 4 dans un rapport de 1:5. Des splénocytes naïfs sans cellules des souris infectées ont servi de témoins. Du TGF-β recombinant de souris (10 ng ml-1, GF346, Millipore) ou anti-TGF-β (10 μgml-1, MAB1835, R&D) a été ajouté à la culture au début. Le peptide apparenté HA (100 μgml-1) a été ajouté à la culture pendant les 5 dernières heures. Brefeldin-A a été ajouté pendant les 3 dernières heures de stimulation et les cellules ont ensuite été traitées pour la coloration intracellulaire.

Pour la coloration TRAF4, suspensions unicellulaires de splénocytes (2,5 × 106 cellules par puits) de WT naïf, IL-17-competent (IL-17+/+) 6.5, ou IL-17 knock-out (IL-17−/−) 6,5 souris ont été stimulées avec le virus de la grippe (souche PR8 ; 0,03 (MOI) multiplicité d'infection) dans du RPMI-1640 complet pendant 48 h in vitro. De l'IL-17 de souris recombinante (0,1 ou 1,0 μgml-1 ; 576006, Biolegend) et/ou du Gefitinib (0,1 ou 1,0 μgM ; Iressa, AstraZeneca) ont été ajoutés à la culture au début. Le peptide apparenté HA (100 μgml-1) a été ajouté à la culture pendant les 5 dernières heures. Brefeldin-A a été ajouté pendant les 3 dernières heures de stimulation et les cellules ont ensuite été traitées de la même manière, comme nous l'avons fait pour la coloration intracellulaire.

Pour la coloration phosphorylée-EGFR, suspensions unicellulaires de splénocytes (2,5 × 106 cellules par puits) de WT naïf, IL-17-compétent (IL-17+/+) 6,5, ou IL-17 knock-out (IL-17-/ −) 6,5 souris ont été stimulées avec le virus de la grippe (souche PR8 ; 0,03 (MOI) Multiplicity of Infection) dans du RPMI-1640 complet pendant 48 h in vitro. De l'IL-17 de souris recombinante (0,1 ou 1,0 μgml-1 ; 576006, Biolegend) et/ou du Gefitinib (0,1 ou 1,0 μgM ; Iressa, AstraZeneca) ont été ajoutés à la culture au début. Le peptide apparenté HA (100 μgml-1) a été ajouté à la culture pendant les 5 dernières heures. Brefeldin-A a été ajouté pendant les 3 dernières heures de stimulation et les cellules ont ensuite été traitées pour la coloration. En bref, les cellules ont d'abord été placées dans du tampon perm froid-III (558050, BD Biosciences) pendant 30 min, lavées avec un tampon de coloration (554657, BD Biosciences) et colorées avec FITC-Phospho-EGFR (Tyr1068) Rabbit anti-Human, Souris (MA5-27995, Invitrogen ; dilution = 1 sur 10) dans un tampon de coloration. Les cellules ont été acquises avec le BD LSRFortessa™ Cell Analyzer pour la cytométrie en flux ou visualisées en microscopie confocale (Leica).

Nous avons mesuré les titres de virus grippaux vivants dans les organes de souris infectées à l'aide d'un test sur plaque de cellules rénales canines Madin-Darby modifiées (MDCK ; The American Type Culture Collection), comme décrit précédemment17,18,19,20,21,22,34. Les organes ont été prélevés aux moments indiqués dans 1 ml de DMEM, congelés instantanément dans de l'azote liquide et stockés à -80 ° C jusqu'à l'analyse. Des dilutions de dix fois des homogénats de tissus ont été préparées dans du DMEM additionné de 10 % de FCS, d'antibiotique-antimycosique (15240-062, GIBCO BRL) et de 0,00025 % de trypsine. Un total de 500 μl de chaque dilution a été ajouté à des monocouches confluentes de cellules MDCK dans des plaques à 6 puits et incubé pendant 1 h à 35 ° C avec 5 % de CO2. Chaque puits a ensuite reçu 2 mL d'agar overlay (0,3 %) et a été incubé pendant 3 jours. Les cellules ont été fixées avec du formol à 10 %, la couche de gélose a été retirée et les monocouches fixées ont été colorées avec du cristal violet (0,02 % dans de l'éthanol à 2 %). Les résultats ont été présentés sous forme d'unité formant plaque (PFU)/ml = (nombre moyen de plaques × 2) × (facteur de dilution −1).

Les poumons de souris expérimentales ont été récoltés au jour 7 après l'infection et fixés avec une solution de formaline tamponnée neutre à 10 %. Après la fixation, les poumons ont été inclus dans de la paraffine et des sections de 5 μm ont été coupées. Les coupes ont été colorées avec de l'hématoxyline et de l'éosine (H&E) et notées à l'aveugle. L'infiltration de cellules inflammatoires, y compris les lymphocytes, les neutrophiles et les plasmocytes, a été notée séparément par les pathologistes comme négative, 1+, 2+ ou 3+ selon la densité d'infiltration. La vascularite et la fibrose ont également été notées négatives, 1+, 2+ ou 3+ en fonction de la gravité, comme décrit précédemment17,18,19,20,21,22,34. L'inflammation globale dans les poumons était représentée par la moyenne de ces scores.

Les données sont exprimées en moyenne ± sd Nous avons utilisé Graphpad Prism version 8 pour les analyses de test t de Student afin de comparer deux groupes à un moment précis. Nous avons également analysé l'ANOVA à deux voies pour les courbes de poids corporel et le test de Gehan – Breslow – Wilcoxon pour les courbes de survie. Nous avons considéré les valeurs p < 0,05 comme significatives.

De plus amples informations sur la conception de la recherche sont disponibles dans le résumé des rapports sur le portefeuille Nature lié à cet article.

Toutes les données à l'appui des conclusions de cette étude sont disponibles dans le document et ses informations supplémentaires. Les données sources numériques des graphiques se trouvent dans les données supplémentaires 1.

Fajgenbaum, DC & June, CH Tempête de cytokines. N. Engl. J. Med. 383, 2255-2273 (2020).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Ni, Y.-N. et coll. L'effet des corticostéroïdes sur la mortalité des patients atteints de pneumonie grippale : une revue systématique et une méta-analyse. Crit. Soins 23, 99 (2019).

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Cao, B. et al. Corticothérapie adjuvante chez l'adulte atteint de pneumonie virale Influenza A (H7N9). Crit. Soin Méd. 44, e318–e328 (2016).

Article CAS PubMed Google Scholar

Rodrigo, C. et al. Les corticostéroïdes comme traitement d'appoint dans le traitement de la grippe. Système de base de données Cochrane. Rév. 3, CD010406 (2016).

Google Scholar PubMed

Nedel, WL et al. Corticoïdes pour la pneumonie grippale sévère : une évaluation critique. Monde J. Critique. Soin Méd. 5, 89–95 (2016).

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Stockman, LJ, Bellamy, R. & Garner, P. SRAS : examen systématique des effets du traitement. PLoS Med. 3, e343 (2006).

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Arabi, YM et al. Corticothérapie pour les patients gravement malades atteints du syndrome respiratoire du Moyen-Orient. Suis. J. Respir. Crit. Soin Méd. 197, 757–767 (2018).

Article PubMed Google Scholar

Groupe de collaboration RECOVERY, Horby, P. et al. Dexaméthasone chez les patients hospitalisés atteints de Covid-19. N. Engl. J. Med. 384, 693-704 (2020).

Article Google Scholar

Angriman, F. et al. Blocage des récepteurs de l'interleukine-6 chez les patients atteints de COVID-19 : mise en contexte des essais cliniques. Lancet Respir. Méd. 9, 655–664 (2021).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Baeten, DLP & Kuchroo, VK Comment les réseaux de cytokines alimentent l'inflammation : l'interleukine-17 et l'histoire de deux maladies auto-immunes. Nat. Méd. 19, 824–825 (2013).

Article CAS PubMed Google Scholar

Huang, CG et al. Persistance virale relative du COVID-19 et cinétique des anticorps. Agents pathogènes. Rév. 10, 752 (2021).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Wang, J. et al. Tempête de cytokines et modifications des leucocytes dans les infections légères et graves par le SRAS-CoV-2 : examen de 3939 patients COVID-19 en Chine et des concepts émergents de pathogenèse et de thérapie. J. Leukoc. Biol. 108, 17–41 (2020).

Article CAS PubMed Google Scholar

Liu, WJ et al. Immunité des cellules T du SRAS-CoV : implications pour le développement d'un vaccin contre le MERS-CoV. Antiviral Res. 137, 82-92 (2017).

Article CAS PubMed Google Scholar

Mahallawi, WH et al. L'infection par le MERS-CoV chez l'homme est associée à un profil de cytokines pro-inflammatoires TH1 et TH17. Cytokine 104, 8–13 (2018).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Li, C. et al. La réponse de l'IL-17 médie les lésions pulmonaires aiguës induites par le virus de la grippe pandémique A (H1N1) de 2009. Cell Res. 22, 528-538 (2012).

Article CAS PubMed Google Scholar

Pacha, O., Sallman, MA & Evans, SE COVID-19 : un cas pour inhiber l'IL-17 ? Nat. Rév. Immunol. 20, 345-346 (2020).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Dutta, A. et al. Altération de la dominance de T-bet dans les lymphocytes T CD4 + découplés à l'IFN-γ avec tempête de cytokines atténuée et mémoire préservée dans la grippe. J. Immunol. 190, 4205–4214 (2013).

Article CAS PubMed Google Scholar

Dutta, A. et al. L'IL-10 inhibe le TGF-β activé par la neuraminidase et facilite le phénotype Th1 au cours de la phase précoce de l'infection. Nat. Commun. 6, 6374 (2015).

Article CAS PubMed Google Scholar

Dutta, A. et al. La stérilisation de l'immunité contre l'infection par le virus de la grippe nécessite une réponse locale des lymphocytes T spécifiques de l'antigène dans les poumons. Sci. Rep. 6, 32973 (2016).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Huang, CT et al. Adjuvant de rapamycine et grippe sévère exacerbée dans un modèle expérimental de souris. Sci. Rep. 7, 4136 (2017).

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Huang, CT et al. Effet de l'aloïne sur la neuraminidase virale et l'immunité des lymphocytes T spécifiques à l'hémagglutinine dans la grippe aiguë. Phytomédecine 64, 152904 (2019).

Article CAS PubMed Google Scholar

Dutta, A. Rôle des NanC pneumococciques dans la maladie grave de la surinfection à Streptococcus pneumoniae par la grippe. Immunohorizons 5, 210–218 (2021).

Article CAS PubMed Google Scholar

Kirberg, J. et al. Sélection thymique de cellules positives simples CD8 + avec un récepteur restreint au complexe majeur d'histocompatibilité de classe II. J. Exp. Méd. 180, 25–34 (1994).

Article CAS PubMed Google Scholar

Hale, JS et al. Sortie thymique chez les souris âgées. Proc. Natl. Acad. Sci. ETATS-UNIS. 103, 8447–8452 (2006).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Lee, Y. et al. Induction et signature moléculaire des cellules TH17 pathogènes. Nat. Immunol. 13, 991–999 (2012).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Feng, Y. et al. L'anticorps neutralisant IL-17A atténue la méningite à éosinophiles causée par Angiostrongylus cantonensis en impliquant la signalisation IL-17RA/Traf6/NF-kappaB. Exp. Cell Res. 384, 111554 (2019).

Article CAS PubMed Google Scholar

Chen, X. et al. L'axe IL-17R-EGFR relie la cicatrisation à la tumorigenèse dans les cellules souches Lrig1(+). J. Exp. Méd. 216, 195-214 (2019).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Bradley, JR & Pober, JS Facteurs associés au récepteur du facteur de nécrose tumorale (TRAF). Oncogene 20, 6482–6491 (2001).

Article CAS PubMed Google Scholar

Matsumoto, R. et al. Le TRAF6 épithélial entraîne une inflammation psoriasique médiée par l'IL-17. JCI Insight 3, e121175 (2018).

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Zepp, JA et al. Avant-gardiste : le facteur 4 associé au récepteur du TNF limite les processus pathologiques et de signalisation médiés par l'IL-17. J. Immunol. 189, 33–37 (2012).

Article CAS PubMed Google Scholar

Guo, XJ & Thomas, PG De nouveaux fronts émergent dans la tempête de cytokines grippales. Sémin. Immunopathol. 39, 541-550 (2017).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Sarawar, SR et al. L'administration d'anticorps anti-IFN-gamma à des souris déficientes en bêta 2-microglobuline retarde la clairance du virus de la grippe mais ne fait pas basculer la réponse vers un phénotype de cellule T auxiliaire 2. J. Immunol. 153, 1246-1253 (1994).

Article CAS PubMed Google Scholar

Szabo, SJ et al. Un nouveau facteur de transcription, T-bet, dirige l'engagement de la lignée Th1. Cellule 100, 655–669 (2000).

Article CAS PubMed Google Scholar

Dutta, A., et al. L'origine de la régulation des cellules effectrices dans l'immunité Th1 marquée par LAG-3 contre une infection grave par le virus de la grippe. Immunologie https://doi.org/10.1111/imm.13620 (2022).

Hwang, ES et al. Destin des cellules T auxiliaires spécifié par l'interaction médiée par la kinase de T-bet avec GATA-3. Sciences 307, 430–433 (2005).

Article CAS PubMed Google Scholar

Lazarevic, V. et al. T-bet réprime la différenciation T(H)17 en empêchant l'activation médiée par Runx1 du gène codant pour RORγt. Nat. Immunol. 12, 96–104 (2011).

Article CAS PubMed Google Scholar

Zielinski, CE et al. Les cellules TH17 humaines induites par un pathogène produisent de l'IFN-γ ou de l'IL-10 et sont régulées par l'IL-1β. Nature 484, 514–518 (2012).

Article CAS PubMed Google Scholar

Du, S. et al. L'IL-17 stimule l'expression de CCL2 dans les myocytes cardiaques via l'activation AP-1 dépendante de Act1/TRAF6/p38MAPK. Scannez. J. Immunol. 91, e12840 (2020).

Article PubMed Google Scholar

Wu, L. et al. Une nouvelle voie de signalisation de l'IL-17 contrôlant la prolifération des kératinocytes et la tumorigenèse via l'axe TRAF4-ERK5. J. Exp. Méd. 212, 1571-1587 (2015).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Ke, Y. et al. Rôle anti-inflammatoire de l'IL-17 dans l'uvéite auto-immune expérimentale. J. Immunol. 182, 3183–3190 (2009).

Article CAS PubMed Google Scholar

Matthias, J. et al. Le sel génère des cellules Th17 anti-inflammatoires mais amplifie la pathogénicité dans les microenvironnements de cytokines pro-inflammatoires. J.Clin. Investir. 130, 4587–4600 (2020).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Li, X. et al. Signalisation basée sur les récepteurs de l'IL-17 et implications pour la maladie. Nat. Immunol. 20, 1594-1602 (2019).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Monto, AS & Fukuda, K. Leçons tirées des pandémies de grippe des 100 dernières années. Clin. Infecter. Dis. 70, 951–957 (2020).

Google Scholar PubMed

Halaji, M. et al. Coronavirus émergents : premier SRAS, deuxième MERS et troisième SARS-CoV−2 : mises à jour épidémiologiques du COVID-19. Infez. Méd. 28, 6–17 (2020).

CAS PubMed Google Scholar

O'Driscoll, M. et al. Modèles de mortalité et d'immunité spécifiques à l'âge du SRAS-CoV-2. Nature 590, 140-145 (2021).

Article PubMed Google Scholar

Naylor, K. et al. L'influence de l'âge sur la génération de lymphocytes T et la diversité des TCR. J. Immunol. 174, 7446–7452 (2005).

Article CAS PubMed Google Scholar

Aspinall, R. L'atrophie thymique associée à l'âge chez la souris est due à une déficience affectant le réarrangement du TCR au cours du développement des lymphocytes T intrathymiques. J. Immunol 158, 3037-3045 (1997).

Article CAS PubMed Google Scholar

Huang, CT et al. Rôle de LAG-3 dans les lymphocytes T régulateurs. Immunité 21, 503–513 (2004).

Article CAS PubMed Google Scholar

Huang, CT et al. Les lymphocytes T CD4+ passent par une phase effectrice au cours du processus d'induction de la tolérance in vivo. J. Immunol 170, 3945–3953 (2003).

Article CAS PubMed Google Scholar

Yang, Y. et al. Des signaux de récepteurs persistants de type Toll sont nécessaires pour l'inversion de la tolérance CD8 médiée par les lymphocytes T régulateurs. Nat. Immunol. 5, 508–515 (2004).

Article CAS PubMed Google Scholar

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Nous remercions le Radiation Research Core Laboratory de l'hôpital Chang Gung Memorial pour le soutien de l'instrument de cytométrie en flux. Le Centre de recherche sur les infections virales émergentes reçoit le soutien du programme du Centre de recherche sur les domaines en vedette dans le cadre du projet de germination de l'enseignement supérieur du ministère de l'Éducation (MOE), de Taïwan et du NSTC 111−2634-F-182-001 du National Science and Technology Council, Taïwan. Ce travail a été soutenu par les projets MOST 111-2314-B-182-029 (AD), MOST-105-2321-B-182A-003-MY3 (AD) et MOST-106-2314-B-182A-160- MY3 (CTH) du ministère de la Science et de la Technologie, Taïwan, et par CMRPVVJ0052 (CYH), CMRPG 3E2081-3 et 3J0721 (CTH) du Medical Research Project Fund, Chang Gung Memorial Hospital, Taïwan.

Centre de recherche sur les infections virales émergentes, Faculté de médecine, Université Chang Gung, Guishan-33302, ville de Taoyuan, Taïwan

Avijit Dutta

Division des maladies infectieuses, Département de médecine, Chang Gung Memorial Hospital, Guishan-33333, Taoyuan City, Taiwan

Avijit Dutta, Sung-Han Hsiao, Chia-Shiang Chang et Ching-Tai Huang

Division de médecine thoracique, Département de médecine, Chang Gung Memorial Hospital, Guishan-33333, Taoyuan City, Taiwan

Chen-Yiu Hung

Département de pathologie, Chang Gung Memorial Hospital, Guishan-33333, Taoyuan City, Taiwan

Tse-Ching Chen

Département de pathologie, Faculté de médecine, Université Chang Gung, Guishan-33302, Taoyuan City, Taiwan

Tse-Ching Chen

Division d'hématologie et d'oncologie, Département de médecine, Chang Gung Memorial Hospital, Guishan-33333, Taoyuan City, Taiwan

Yung-Chang Lin

Division d'hématologie et d'oncologie, Faculté de médecine, Université Chang Gung, Guishan-33302, ville de Taoyuan, Taïwan

Yung-Chang Lin

Division d'hépatogastroentérologie, Département de médecine, Chang Gung Memorial Hospital, Guishan-33333, Taoyuan City, Taiwan

Chun-Yen Lin

Division d'hépatogastroentérologie, Faculté de médecine, Université Chang Gung, Guishan-33302, ville de Taoyuan, Taïwan

Chun-Yen Lin

Division des maladies infectieuses, Faculté de médecine, Université Chang Gung, Guishan-33302, ville de Taoyuan, Taïwan

Ching-Tai Huang

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AD et C.-TH ont conçu les études de recherche, analysé les données et rédigé l'article ; T.-CC a réalisé un scoring pathologique des coupes pulmonaires ; AD, C.-YH, S.-HH, C.-SC, T.-AC, Y.-CL et C.-YL ont effectué la recherche.

Correspondance à Ching-Tai Huang.

Les auteurs ne déclarent aucun intérêt concurrent.

Communications Biology remercie Hugh D Mitchell et les autres examinateurs anonymes pour leur contribution à l'examen par les pairs de ce travail. Rédacteurs en chef de la manipulation principale : Damon Tumes, Eve Rogers et Christina Karlsson Rosenthal. Un dossier d'examen par les pairs est disponible.

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Réimpressions et autorisations

Dutta, A., Hung, CY., Chen, TC. et coll. Un axe IL-17-EGFR-TRAF4 contribue à l'atténuation de l'inflammation pulmonaire dans la grippe sévère. Commun Biol 6, 600 (2023). https://doi.org/10.1038/s42003-023-04982-0

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Reçu : 11 septembre 2022

Accepté : 25 mai 2023

Publié: 03 juin 2023

DOI : https://doi.org/10.1038/s42003-023-04982-0

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